1. Izmantojiet tiešsaistes filtrus
Iekšējais filtrs tiek novietots starp automātisko paraugu un hromatogrāfijas kolonnu (vai aizsargkolonnu). Parastie in-line filtri ir sadalīti nerūsējošā tērauda iekšējos filtros ar nomaināmu frit (0,5 μm vai 0,2 μm) un vienreizējās lietošanas PEEK. Tiešsaistes filtriem, kas izgatavoti no dažādiem materiāliem, parasti jāizvēlas sieta plāksne ar mazāku apertūras atvērumu nekā kolonnas frite plate, lai efektīvi pārtvertu daļiņas, kas var bloķēt hromatogrāfiskās kolonnas fritplāksni. Kad ir konstatēts, ka instrumenta spiediens sāk palielināties, iespējams, ka in-line filtra frit sāk aizsprostoties, un mums tas ir jāatjaunina, pirms tas kļūst pilnīgi aizsērējis.
In-line filtri darbojas tāpat kā membrānas, bet neprasa papildu darbu. Pēc parauga centrifugēšanas joprojām ir iespējams, ka instrumentā nonāks neliels daļiņu daudzums, un atlikušās daļiņas var pārtvert ar iekšējo filtru, kas atrodas hromatogrāfijas kolonnas priekšā. Turklāt tiešsaistes filtra priekšrocība ir tā, ka tas ir vienkāršs un viegli aizstājams. Parasti tā nomaiņa aizņem tikai 5 minūtes, un to var atsākt lietošanai, un tam nav nepieciešams pavadīt laiku, pielāgojot vai kalibrējot. Vēl viena priekšrocība ir tā, ka iekšējais filtrs var arī filtrēt daļiņas, ko rada dažu instrumenta daļu novecošanās nodilums. Es stingri atbalstu to, ka katrs šķidrās fāzes instruments ir aprīkots ar iekšējo filtru. Pat ja tiek izmantota aizsarga kolonna, es arī iesaku uzstādīt iekšējo filtru pirms aizsarga kolonnas.
2. Izmantojiet aizsargkolonnu
Aizsargkolonna ir īsa hromatogrāfijas kolonna, kas uzstādīta hromatogrāfijas kolonnas priekšā. Tas parasti ir 1-2 cm garš, un iepakojums ir saskaņots ar izmantotās kolonnas iepakojumu, un izmantotās frites poru izmērs nav lielāks par kolonnā izmantoto frite. Aizsargu kolonnai ir divas funkcijas: 1) tā var bloķēt daļiņas, kas var bloķēt kolonnu; (2) tā kā aizsargkolonna un kolonnas iepakojums ir saskaņoti, visi ķīmiskie piemaisījumi, kas var neatgriezeniski mijiedarboties ar kolonnas iepakojumu bez maksimuma sasniegšanas, vispirms tiks uztverti ar aizsargkolonnu.
Izmantojot aizsargu kolonnu, noteikti var pagarināt kolonnas kalpošanas laiku. Tomēr, pirms apsvērt, vai izmantot aizsargkolonnu, ieteicams novērtēt šādus punktus:
(1) Aizsargu kolonna nav lēta, tāpēc apsveriet, vai aizsargkoleņa iegādes izmaksas var kompensēt ar palielinātu kolonnas kalpošanas laiku;
(2) Cik ilgs ir sarga kolonnas kalpošanas laiks? Ir jāpievērš uzmanība tam, kad aizsarga kasetne ir jānomaina, lai nepiesārņotu hromatogrāfisko kolonnu, jo nomaiņa ir par vēlu;
(3) Kā izskalot aizsargu kolonnu? Skalošanas laikā aizsargkolonna un hromatogrāfijas kolonna jāmazgā atsevišķi, lai izvairītos no aizsargkolonnā uzkrāto piemaisījumu skalošanas hromatogrāfijas kolonnā;
(4) Negaidiet, ka tiks palielināta kolonnas efektivitāte, jo ir pievienota 1–2 cm aizsargkolonna. Lai gan aizsargkolejas uzstādīšana ir līdzīga kolonnas garuma palielināšanai, aizsargkolona izmantošana pievieno arī divus savienotājus un savienojošās caurules, kas samazinās instrumentu sistēmas kolonnas efektivitāti, tāpēc būtu labi, ja varētu saglabāt kolonnas efektivitāti bez aizsargkolona.
Lieki teikt, ka aizsargu kolonnu izmantošana noteikti var pagarināt kolonnas kalpošanas laiku, bet katrai laboratorijai ieteicams novērtēt apsardzes kolonnu nepieciešamību ekonomikas un pūļu ziņā. Pat ar aizsargu kolonnu es ieteiktu ievietot iekšējo filtru starp aizsargu kolonnu un autosampleri, galu galā filtra nomaiņa ir lētāka nekā aizsarga kolonnas nomaiņa un palielina gan aizsarga kolonnas, gan kolonnas kalpošanas laiku.
3. Neievadiet neapstrādātus paraugus
Ar iepriekšēju apstrādi vai bez tās ieteicams visus paraugus pirms injekcijas filtrēt vai centrifugēt. Piemēram, ja paraugu filtrē caur filtra membrānu, lai atdalītu daļiņas un tādējādi samazinātu hromatogrāfijas kolonnas fritmas aizsērēšanu, filtra membrānas poru izmēram jābūt mazākam par hromatogrāfijas kolonnas frites poru izmēru. Parasti hromatogrāfijas kolonnās ar daļiņām, kas lielākas par 3 μm, izmanto 2 μm frit, hromatogrāfijas kolonnās ar 3 μm daļiņām izmanto 0,5 μm frit, un kolonnās ar daļiņām, kas mazākas par 3 μm, parasti izmanto 0,2 μm frit, tāpēc vispārējos 0,45 μm filtrus būtībā var izmantot visās hromatogrāfijas kolonnās, izņemot daļiņas zem 2 μm; kolonnām ar daļiņām zem 2 μm parasti izmanto filtrus ar 0,2 μm porām. Lielākā daļa filtru membrānu ir fasētas, un tās var tieši savienot ar šļirci filtrēšanai vai izmantot kā filtra plāksni 96 aku platē.